一、設(shè)備和材料

1）biocomma^® CommaMix 多功能混勻儀
2）Copure^® PRP 磷脂去除柱
3) Copure^® PPT 蛋白沉淀過(guò)濾板

二、儀器條件

儀器：FH-6000MD UPLC-MS/MS
色譜柱：Hypersil Gol.D aQ (2.1mm×100 mm, 1.9 μm)
柱溫：35 ℃
樣品溫度：10 ℃
進(jìn)樣量：5 μL
流動(dòng)相：A：Buffer A B：Buffer B
洗脫方式：梯度洗脫

表 1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

離子化方式：ESI+ 電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：40 arb 輔氣壓力：2 arb
離子傳輸管：350 ℃ 輔氣溫度：320 ℃
采集方式：Precursor Ion Scan ( 子離子 184 m/z，母
離子范圍 184~1000 m/z)

三、實(shí)驗(yàn)步驟

1、樣品提取
1） 將 Copure^® PPT 96 蛋白沉淀過(guò)濾板置于 96 孔收集板上，加入 400 μL 沉淀劑。
2） 將 100 μL 血清樣本分裝加入到 96 孔蛋白沉淀過(guò)濾板各孔中。
3） 將蛋白沉淀板上端各孔封膜后，置于多功能混勻儀上，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速到 2000 rpm，充分混合 2 min，然后靜置10 min，待蛋白沉淀完全。
4） 3000 rpm離心2 min，收集過(guò)濾液到96孔收集板中，待凈化。
2、樣品凈化
1）活化： 向Copure^® PRP及各品牌去磷脂產(chǎn)品（規(guī)格均為 60 mg/1 mL）中加 2 mL 甲醇，棄去流出液。
2）凈化： 取上述樣品提取步驟，經(jīng)過(guò)血清蛋白沉淀過(guò)濾后的收集液，過(guò)磷脂去除產(chǎn)品，收集流出液，過(guò) 0.22 μm 有機(jī)濾膜，上機(jī)分析。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表 2 不同品牌的磷脂去除產(chǎn)品對(duì)比效果

結(jié)論：經(jīng)過(guò) UPLC-MS/MS 檢測(cè)分析，逗點(diǎn)生物磷脂去除產(chǎn)品與市面類(lèi)似產(chǎn)品的磷脂去除效果相當(dāng)，均可滿足測(cè)試要求。

五、訂購(gòu)信息