一、設備和材料

1）Copure^® PPT 96 孔蛋白沉淀板
2）biocomma^® CommaMix 多功能混勻儀
3）biocomma^® 96 孔氮吹儀
4）biocomma^® 96 孔正壓提取裝置

二、儀器條件

儀器：FH-6000MD UPLC-MS/MS
色譜柱：Hypersil Gol.D aQ (2.1 mm×100 mm, 1.9 μm)
柱溫：30 ℃
樣品溫度：10 ℃
進樣量：2 μL
流動相：A：Buffer A B：Buffer B
洗脫方式：梯度洗脫
表 1 流動相梯度洗脫條件

電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：35 arb
輔氣壓力：2 arb
離子傳輸管：350 ℃
輔氣溫度：340 ℃
采集方式：多反應監測
表 2 化合物的保留時間及離子對參數

注：* 表示定量離子對

三、實驗步驟

1、樣品提取
將 25 μL 血漿和 25 μL 50% 甲醇水溶液混合均勻。
2、樣品凈化
1） 向 96 孔 PPT 板中加入 250 μL 甲醇，再將上述混好的血漿加到 96 孔 PPT 板中，在多功能混勻儀上1000 r/min 渦旋 4 min 混勻。
2） 使用正壓裝置，調節壓力，將 PPT 板上液體壓入到96 孔收集板中，3 分鐘后停止正壓裝置。
3）將收集板置于 96 孔氮吹儀上，40 ℃氮吹濃縮至近干。
4） 向收集板中各孔中加入 500 μL 0.1% 甲酸水溶液，渦旋混勻供上機測試。

四、實驗結果

使用空白血漿樣品配制 7 個不同濃度的校準標曲點，普瑞巴林和替米沙坦的濃度分別為：5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL。所得樣品采用上述前處理方法凈化并上機檢測，基質標準曲線見表 3。另取血漿樣品添加不同濃度目標物進行加標回收實驗，測定結果見表 4。
表 3 基質標準曲線

表4 血漿中普瑞巴林和替米沙坦加標回收實驗結果（n=3）

由以上數據表明：Copure^® PPT 96 孔蛋白沉淀過濾板對血漿樣本中普瑞巴林和替米沙坦的檢測平均回收率在 60-110% 之間，RSD 小于 10%，滿足測試要求

五、訂貨信息