一、設(shè)備和材料

1）biocomma^® CommaMix 多功能混勻儀
2）Copure^® SLE 96 孔固相支持液液萃取板
3）biocomma^® 96 孔氮吹儀
4）biocomma^® 96 孔正壓提取裝置

二、儀器條件

儀器：FH-6000MD UPLC-MS/MS
色譜柱：Waters Xbridge C18 (2.1mm×50 mm, 3.5 μm)
柱溫：40 ℃
進(jìn)樣量：5 μL
流動(dòng)相：A：Buffer A B：Buffer B
洗脫方式：梯度洗脫
表 1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：35 arb
輔氣壓力：2 arb
離子傳輸管：350 ℃
輔氣溫度：340 ℃
采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)
表 2 各組分母離子和子離子檢測(cè)的離子對(duì)參數(shù)

三、實(shí)驗(yàn)步驟

1、樣品提取
取 100 μL 血清置 1.5 mL 離心管中，加入 100 μL 內(nèi)標(biāo)萃取液，2500 rpm 渦旋 1 min 混合均勻，7000 rpm 瞬離 10 s，再加入 100 μL 緩沖液，2500 rpm 渦旋 1 min混合均勻后 7000 rpm 瞬離 10 s。
2、樣品凈化
1） 上樣：將預(yù)混合好的樣液全部上樣到 400 μL/mL 的SLE 板上，待全部樣品浸潤(rùn)后靜置 5 min。
2） 洗脫：用 2.10 mL 洗脫液分三次進(jìn)行洗脫，最后一步洗脫結(jié)束，將SLE板與收集板整體放到正壓裝置上，開啟壓力至 10-15 psi，約 5 s，完全收集洗脫液。
3） 氮吹復(fù)溶：將洗脫液 40 ℃下用氮吹儀氮吹至干，使用 50 μL 復(fù)溶液復(fù)溶，2500 rpm 渦旋 3 min，2000rpm、4 ℃離心 1 min，上機(jī)進(jìn)樣檢測(cè)。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

                              表 3 板內(nèi)穩(wěn)定性結(jié)果                                                                      表 4 加標(biāo)回收率結(jié)果
 

                                                                     圖 1 脂溶性維生素檢測(cè)的色譜圖

由以上數(shù)據(jù)表明：Copure^® SLE 96 孔固相支持液液萃取板對(duì)脂溶性維生素的檢測(cè)回收率在 70-110% 之間，且穩(wěn)定性好，滿足測(cè)試要求。

五、訂購(gòu)信息